Ved differensialbestemmelse av enterobakterier og noen vibrioer, inntar Voges-Proskauer-reaksjonen en spesiell plass. Testen er basert på bakteriers evne til å fermentere glukose for å danne acetoin.
Kjernen i forskningsprosessen
I mikrobiologi blir Voges-Proskauer-reaksjonen ofte brukt til å differensiere innenfor Yersinia-familien av enterobakterier (inkludert patogenene til pseudotuberkulose og enterokolitt), Escherichia coli og sporedannende aerober. Resultatet visualiseres ved å farge mediet når visse reagenser tilsettes.
Denne testen tilhører IMViC-serien (forkortelse av Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) - en gruppe identifikasjonstester inkludert differensialdefinisjoner:
- med indol, basert på nedbrytning av tryptofan til indol, brukt i nærvær av et Kovacs- eller Ehrlich-reagens;
- brukermethylroth, eller methyl red, som oppdager en gitt pH som et resultat av glukosemetabolisering;
- Voges-Proskauer-reaksjoner for påvisning av acetyl-metylkarbinol;
- utnyttelse av sitrat med fargeendring som følge av alkalisering av mediet.
Essensen av prosessen er visualisering av tilstedeværelsen av diagnostiserte bakterier på grunn av interaksjonen mellom acetoin dannet av dem og kaustisk kalium i nærvær av oksygen. Acetyl-metylkarbinol oksideres til diacetyl, som danner en lys rød eller rosa forbindelse. Øk testens følsomhet ved å introdusere alfa-naftol før du tilsetter kaustisk kalium.
Testinnstilling
Formuleringen av Voges-Proskauer-reaksjonen involverer preliminær dyrking av mikroorganismer. En ren kultur blir sådd på Clarks differensialdiagnostiske medium, en variant av dette er Clarks buljong (uten tilsetning av agar-agar). Enten ferdiglaget medium brukes, eller tilberedes uavhengig. Ingredienser inkluderer:
- 5g pepton;
- 5g glukose;
- 5g dibasisk kaliumfosfat;
- 1L destillat.
Under studien inokuleres kulturen med en steril bakteriologisk løkke i et flytende medium. Mengde - 5 ml i et reagensglass pluss kontroll. Inkubasjonen utføres ved en temperatur på 35-37 grader i to dager. Deretter utføres en studie av Voges-Proskauer-reaksjonen i trinn:
- 2, 5 ml buljongkultur overføres til et sterilt rør.
- Tilsett seks dråper alfa-naftol (5 % alkoholløsning).
- Legg til 40 %en løsning av kaustisk kalium i en mengde på 0,1 ml, eller to dråper.
- Røring utføres ved å riste reagensrøret forsiktig.
- Vurder resultatet etter 15 minutter fra starten av eksperimentet.
En alternativ testmetode er inkubasjon over natten, hvor varigheten reduseres til 18 timer eller opptil en dag. I tillegg til denne metoden brukes også en ekspresstest: en kultur introduseres i en løkke i 2 ml av mediet, inkuberes i omtrent fire timer, deretter tilsettes reagenser i en lik mengde på 2-3 dråper, blandes og resultatet evalueres etter ti minutter.
Kontrollen er en av årsakene til pneumoni Klebsiella pneumoniae - stamme atcc 13883.
Evaluering av resultatet
Etter den nødvendige tiden etter tilsetning av reagensene (fra 5 til 15 minutter), bør en kirsebærrød farge observeres med en utt alt positiv reaksjon, rød og rosa - med en svak positiv reaksjon. Ingen endring er registrert som et negativt resultat.
Overskudd av kaustisk kalium i en løsning kan gi en imitasjon av en positiv reaksjon, flekker i en kobberfarge. I dette tilfellet bør den negative responsen til den testede kolonien registreres. Kobberfarging vises også i tilfeller der vurderingen er gitt en time etter introduksjonen av reagensene.
Ved vurdering av resultatet må det tas hensyn til at langvarig dyrking av de undersøkte mikroorganismene (mer enn tre dager) fører til forsuring av mediet, noe som kan føre til feil resultat av studien. Reaksjonen kan være mildt positiv ellerfalsk negativ.
Krav til testreagenser
Voges-Proskauer-reagenser må oppfylle krav som riktig konsentrasjon, høy renhet og stabilitet, noe som oppnås gjennom riktig lagring.
Klar til bruk testsett inneholder vanligvis reagenser for 100 eller flere bruksområder og kommer i hetteglass av plast eller tonet glass. Kvaliteten er regulert av relevant dokumentasjon.
