Metoder for å sette opp en nedbørsreaksjon

Innholdsfortegnelse:

Metoder for å sette opp en nedbørsreaksjon
Metoder for å sette opp en nedbørsreaksjon
Anonim

Denne artikkelen vil være viet fenomenet nedbørsreaksjonen. Her vil vi vurdere trekk ved formuleringen av dette fenomenet, diffusjonsfenomenet, generelle egenskaper, rolle i menneskelivet og mye mer.

Introduksjon til fenomenet

utfellingsreaksjon generell karakteristikk
utfellingsreaksjon generell karakteristikk

Nedbør er et fenomen av en serologisk type, hvor løselige antigener interagerer med antistoffer og som et resultat av dette observeres nedbør - et bunnfall.

Det generelle kjennetegnet ved utfellingsreaksjonen er en form for koordinert påvirkning av antigen og antistoff. Disse typene interaksjoner gjør det mulig å bestemme tilstedeværelsen av ukjente antigener i teststoffet ved å tilsette kjente antistoffer og antigener. Utfellingsprosessen uten tilstedeværelse av s alter vil forløpe dårligere, og det beste optimum ligger innenfor området 7,0-7,4 pH.

Reaksjonens bestanddeler

utfellingsreaksjonskomponenter
utfellingsreaksjonskomponenter

Det er tre hovedelementer blant komponentene i nedbørsreaksjonen:

  1. Et antigen som har en molekylær natur. Den er i den fine typen tilstand, med andre ord, denløselig. Et slikt antigen kalles også et presipitogen, som er et lysat eller vevsekstrakt osv. Et presipitogen har en karakteristisk forskjell fra et agglutinogen, som ligger i størrelsen på partiklene det består av. Agglutinogen har en iboende cellestørrelse, og presipitogener er i samsvar med størrelsen på molekylet. Antigenløsningen er preget av gjennomsiktighet.
  2. Et antistoff funnet i humant blodserum, så vel som i immundiagnostisk serum, som inneholder de studerte antistoffene.
  3. Elektrolytter er natriumkloridløsninger som er isotoniske.

Presipitogenproduksjon

Å sette opp en utfellingsreaksjon er umulig uten et presipitogen, som oppnås ved å male materialer og trekke ut proteinantigener fra dem. Ekstraksjon skjer ved koking eller andre metoder.

Lysater, samt vevs- og organekstrakter, blodserum, ulike typer filtrater basert på mikrobielle buljongkulturer, samt s altekstrakt av mikroorganismer og autolysatstoffer, er slående eksempel på utfellingsgener.

Oppsett i nedbør

La oss nå vurdere metoden for å sette opp utfellingsreaksjonen.

Det utføres en ringutfellingsreaksjon som foregår i spesialpreparerte prøverør. Serum introduseres i oppvaskens hulrom, og helles over veggen ved hjelp av en pipettetut. Deretter legges passende mengde utfelling forsiktig på toppen, og deretter bringes røret til en vertikal posisjon fra en horisontal. Å sette opp og ta hensyn til nedbørsreaksjonen er en meget grundig operasjon. Resultatet registreres etter utseendet av en hvit ring på grensen mellom antigenet og antistoffet. Hvis de reagerende elementene i reaksjonen samsvarer med hverandre, binder de seg, men dette blir merkbart etter lang tids interaksjon

Utfellingsreaksjonen utføres også i en petriskål eller på et glass lysbilde, hvor agar gel overføres, påfør den i et lite lag. Etter at den stivner i gelen, kuttes et lite antall brønner ut i hvilke antigener og antistoffer skal plasseres. Det er to måter å utføre denne handlingen på: metoden for radiell immundiffusjon og dobbel immundiffusjon.

utfellingsreaksjon brukes ikke
utfellingsreaksjon brukes ikke

Generell informasjon

Mekanikken i arbeidet med nedbør ligner på agglutinasjonsanordningen. Under påvirkning av serum av immuntype reduserer antigenet, som allerede har gått inn i reaksjonen, spredningsgraden. En viktig betingelse er gjennomsiktigheten av både serum og antigen.

Du kan forbedre registreringen av reaksjonen hvis du legger antigener på antistoffer. Som et resultat kan utseendet av utfellinger i form av en ring observeres. Dette fenomenet kalles ringutfelling og utføres i spesielle rør med en diameter på 2,5 til 3,5 mm. Et av de vanligste eksemplene på en utfellingsreaksjon er diagnosen miltbrann.

Nedbør gjør det mulig å bestemme toksisitetsnivået til en difterikultur i agar.

Under reaksjonen som vurderesutfelling av antigene komplekser og antistoffer forekommer. Nedbør er et immunologisk fenomen som lar deg bestemme mengden antistoffer i blodserumet til en syk eller vaksinert person og dyr.

Titreringskonsekvens

metoder for å sette opp en utfellingsreaksjon
metoder for å sette opp en utfellingsreaksjon

Det er viktig å vite at data oppnådd ved titrering av metoden ovenfor ikke er kvantifiserbare. For å lage og analysere en kvantitativ vurdering av det inneholdte antallet antistoffer, ble det utviklet en spesiell reaksjonsteknikk av M. Heidelberger og E. Kabat, som er basert på søk og identifisering av ekvivalenssonen. Blanding av alderstallet på antigener med et konstant volum av antiserum fører til en økning i det opprinnelig dannede bunnfallet, og deretter avtar det igjen på grunn av en økning i evnen til å oppløse antigenkompleksene. Ved å bestemme mengden antistoffer i supernatantene i hvert rør, kan du finne at et visst antall retter med antistoffer vil mangle væske. Her vil det i sammenligning med andre reagensrør dannes det største bunnfallet. På grunn av dette og subtraksjon av det antigene proteinutfellingen fra den totale verdien av proteiner, er det mulig å oppnå den nøyaktige verdien av antistoffene som finnes i volumet til det spesifikke serumet som studeres. Videre bestemmes mengden proteinmolekyler i bunnfallet av mengden nitrogen eller ved hjelp av kolorimetriske metoder.

Evaluering av verdier

innstilling og redegjørelse for nedbørsreaksjonen
innstilling og redegjørelse for nedbørsreaksjonen

Estimering av nedbørsverdier i diagnostisk metodikk bør ta hensyn til muligheten for tilstedeværelse i immunserumet av et antistoff som ikke har egenskapen til presipitin, hvorav det følger at selve bunnfallet ikke er dannet etter å ha reageret med antigener. Listen over slike molekyler inkluderer ufullstendige antistoffer og noen arter fra gruppen av gamma-A-globuliner.

Nedfellingsreaksjonen under laboratorieforhold finner sin anvendelse i ulike typer modifikasjoner. For eksempel brukes termoprecipitasjonsreaksjonen til å oppdage bakterielle antigener av botulisme, miltbrann, etc., som ikke gjennomgår termisk denaturering. I motsetning til ringutfelling bruker denne typen reaksjon filtrater av det aktuelle materialet i kokt tilstand.

Analyse av utfellingsreaksjonen i en kompleks blanding gjør at man ikke kan karakterisere egenskapene til individuelle elementer i blandingen. I slike tilfeller tyr en person til metoden for utfelling i agar, og bruker også immunelektroferese.

diffus nedbør

nedbørsreaksjoner
nedbørsreaksjoner

I dette forskningsområdet er det konseptet med en diffus nedbørsreaksjon (RPD). Den er basert på evnen til å diffundere i gelen av antistoffer og løselige antigener. Diffusjon er evnen til et molekyl av et bestemt stoff til å trenge inn i molekylene til et annet, som er forårsaket av termisk bevegelse.

Gel er et dispergert type system der væskefasen er jevnt fordelt i den faste fasen. Oftest brukes agargel til en slik reaksjon.

Etter å ha gitt parametrene, innforhold under hvilke molekylene kan diffundere i forhold til hverandre, vil møtet deres være ledsaget av dannelsen av et antigen + antistoffkompleks. En slik neoplasma er i stand til å diffundere, være i selve gelen, og den vil utfelles, ta form av en stripe som kan oppdages med det blotte øye. Hvis antigenet og antistoffet er homologe, vil det ikke dannes noe bånd.

Å skape forholdene under hvilke diffusjon vil finne sted mens de er i agarlaget, innebærer å helle komponentene, men det totale antallet brønner og deres relative plassering bestemmes av hvilken type oppgave som kreves bestemme. RPD gir en person muligheten til å oppdage og identifisere ukjente isolerte virus ved å teste med kjente antistoffsera.

Application

diffus nedbørsreaksjon
diffus nedbørsreaksjon

Nedbør er mye brukt, ikke bare ved diagnostisering av sykdommer, men finner også anvendelse i rettsmedisinske undersøkelser. Det er vanskelig å forestille seg en analyse der det er mulig å bestemme arten av blod, del av et organ eller vev som finnes på et kriminelt våpen som ikke bruker utfellingsreaksjonen. Under denne prosessen brukes utfellende sera, som oppnås ved å immunisere forskjellige dyr og fugler. Det er viktig at serumtiternivået ikke er mindre enn 1:10000, og det må også ha tilstrekkelig spesifisitet. Fra den oppdagede flekken av blod eller dens skorpe, lages et ekstrakt for fysisk. løsning, som vil bli ytterligere utsatt forutfellende serum. I henhold til denne reaksjonen er det mulig å fastslå typene av vev og organproteiner til både mennesker og dyr. Å skaffe grumsete ekstrakter tvinger en til å ty til nedbør på agar.

Konklusjoner

Ved å analysere den leste informasjonen kan vi konkludere med at nedbørsreaksjoner er ekstremt viktige for en person, siden de tillater diagnostisering av ulike antigener ved bruk av antistoffer, dette fenomenet er også mye brukt i rettsmedisinske undersøkelser og lar deg identifisere typen blod, vev eller organ i forhold til et bestemt emne. Det finnes flere typer og metoder for nedbør, som brukes i samsvar med de nye behovene til problemet som skal løses.

Anbefalt: