Utvalget av bakterielle infeksjoner krever en klar identifikasjon av patogenet og definisjonen av arten. For å bestemme typen mikroorganisme blir mikrobiologer hjulpet av dens tinktorielle egenskaper - mikrobens mottakelighet for farging med forskjellige fargestoffer. Denne metoden lar deg utforske morfologien til patogenet. Bakterienes fargeegenskaper er av stor betydning for praktisk og teoretisk forskning innen mikrobiologi.
Mikrobiell forskning
I bakteriologi finnes det mange metoder for farging av mikroorganismer. Alle av dem er basert på de fargende egenskapene til bakterier. Farging lar deg bestemme deres form, struktur, størrelse, relative posisjon. Dette gjør det mulig å løse problemene med å systematisere typene mikroorganismer innen generell biologi og komparativ mikrobiologi.
Hvorfor male dem
Bakterier er praktisk t alttransparente organismer, og uten bruk av farging er de dårlig synlige for konvensjonell mikroskopi. Du kan bruke spesielle typer mikroskopi (fasekontrast, mørkt felt) for å studere objekter, men den enkleste måten er å farge, hvoretter bakteriene blir synlige i et konvensjonelt lysmikroskop.
Prøveforberedelse
Uavhengig av fargeteknikken som brukes, er det ensartede regler for klargjøring av objektet som studeres. Følgende trinn er obligatoriske:
- Sterile instrumenter lager et utstryk på et glassglass.
- Prøven tørkes. Dette gjøres ved romtemperatur eller ved hjelp av tørkeskap.
- Følgt av fikseringsstadiet - mikroorganismer festes til glasset med spesielle forbindelser.
- Riktig farging - prøven dekkes med fargestoff i en bestemt periode, deretter vaskes den av.
- Sluttørking - prøven tørkes igjen.
De vanligste fargestoffene
De mest brukte fargestoffene er basert på anilin med forskjellige syreverdier (pH). De fleste fargestoffer er pulver som er fortynnet i alkohol.
Fargestoffer der kationer er fargestoffene kalles basiske (pH større enn 7). De kan brukes til å farge mikroorganismer i rød (magenta, safranin), fiolett (metylfiolett, tionin), blå (metylenblå), grønn (malakittgrønn), brun (chrysoidin) og svart (indulin) farger.
Fargestoffer, der fargestoffene er anioner, kalles sure (pH mindre enn 7). De vil farge prøven rød (eosin), gul (picrin) eller svart (nigrosin).
Det er en gruppe nøytrale fargestoffer (for eksempel rhodamin B), der både kationer og anioner fungerer som fargestoffer.
Kultur er død eller levende
Fargemetoder er delt inn i to grupper i henhold til livsformen til testprøven.
- Vital (livstid) farging. Denne metoden for å studere egenskapene til mikroorganismer brukes i studiet av levende vev, noe som gjør det mulig å observere de vitale prosessene til mikrober. For denne fargingen brukes fargestoffer med lav toksisitet og høy penetreringsevne.
- Post-vital farging. Dette er farging av døde eller drepte mikroorganismer. Takket være de tinktorielle egenskapene til bakterier, bestemmer mikrobiologer deres struktur. Det er denne fargingen som er mest brukt.
Gram-positive og Gram-negative
Det er disse egenskapene til bakterier som finnes i bruksanvisningen for ulike medisiner. Denne metoden for å studere de tinktorielle egenskapene til bakterier er basert på bruk av gentian fiolett fargestoff og jodfiksering. Dette er teknikken til Hans Christian Gram, en dansk lege som foreslo det i 1884. Som et resultat av denne fargingen deles bakterier inn i to grupper:
- Gram (+) - blir blå(stafylokokker og streptokokker).
- Gram (-) - flekk rosa til rød (enterobakterier, salmonella, E. coli).
Ulike fargeresultater skyldes forskjellige fargeegenskaper til bakterievegger. Gram-fargingsmetoden er fortsatt den viktigste i diagnostisering av enkelte infeksjonssykdommer.
Andre fargeteknikker
La oss karakterisere noen flere metoder som er mye brukt i bakteriologi.
- Ziehl-Nelson-metoden - bestemmer syreresistensen til bakterier. Den identifiserer årsakene til tuberkulose og mykobakterier.
- Romanovsky-Giemsa-teknikk - farger acidofile (eddiksyre og melkesyre) bakterier røde, og basofile (spiroketter og protozoer) blå.
- Morozovs teknikk - farger bakterier brune og gjør flagellene deres synlige.
Spore kan sees
Tsiels fuchcinfarging lar deg se bakteriesporer. Med en rosa farge etter farging, er de tydelig synlige mot bakgrunnen av blå bakterier. Denne metoden er også et bakteriologisk verktøy og er av stor praktisk betydning.
